Giardia duodenum jẹ ara-ara parasitic ti o fa giardiasis, akoran ifun paapaa wọpọ ni awọn ọmọde ọdọ pẹlu awọn ami iwosan ti igbuuru.A ti royin tẹlẹ pe extracellular G. duodenalis nfa imuṣiṣẹ ti oligomerization intracellular oligomerization-like receptor 3 (NLRP3) abuda nucleotides ati ṣe ilana awọn idahun iredodo ogun nipasẹ ifasilẹ vesicle extracellular (EV).Sibẹsibẹ, awọn ilana molikula gangan ti duodenococcal EV (GEV) ti o niiṣe pẹlu pathogen ti o ni ipa ninu ilana yii ati ipa ti NLRP3 inflammasome ni giardiasis wa lati wa ni alaye.
Recombinant eukaryotic ikosile plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati alpha-7.3 giardins ni GEV ni a ṣe, ti a yipada si awọn macrophages peritoneal akọkọ ti Asin, ati ti a rii nipasẹ wiwọn ifọkansi iredodo molecule caspase-1.Ipele ikosile p20 ti ṣe ayẹwo..G. duodenalis alpha-2 ati alpha-7.3 giardines ni akọkọ ti a mọ nipa wiwọn NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 ati caspase-1 p20), IL secretion.Awọn ipele 1β, amuaradagba iranran apoptotic (ASC) awọn ipele oligomerization, ati agbegbe imunofluorescent ti NLRP3 ati ASC.Ipa ti NLRP3 inflammasome ni pathogenicity ti G. duodenalis lẹhinna ni a ṣe ayẹwo nipa lilo awọn eku ninu eyiti a ti dina NLRP3 imuṣiṣẹ (NLRP3 eku ti a ti dina) ati awọn iyipada pathological ni iwuwo ara, ẹru parasitic duodenal, ati tissu duodenal ni abojuto.Ni afikun, a ṣe iwadi boya hiardines alpha-2 ati alpha-7.3 ṣe ifasilẹ IL-1β ni vivo nipasẹ NLRP3 inflammasome ati pinnu ipa ti awọn ohun elo wọnyi ni pathogenicity ti G. duodenalis ninu awọn eku.
Alpha-2 ati alpha-7.3 giardines nfa imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome in vitro.Eyi yori si imuṣiṣẹ ti p20 caspase-1, ilosoke ninu awọn ipele ikosile ti NLRP3, pro-IL-1β, ati awọn ọlọjẹ pro-caspase-1, ilosoke pataki ni yomijade IL-1β, dida awọn aaye ASA ninu cytoplasm, ati ifilọlẹ ti ASA oligomerization.NLRP3 iredodo Pipadanu Penile mu ki pathogenicity ti G. duodenalis pọ si ninu awọn eku.Awọn eku ti a tọju pẹlu cysts nipasẹ gavage lati awọn eku dina NLRP3 ṣe afihan nọmba ti o pọ si ti awọn trophozoites ati ibajẹ nla si villi duodenal, ti o ni afihan nipasẹ awọn crypts necrotic pẹlu shrunken ati ẹka.Ni awọn idanwo vivo ti fihan pe giardines alpha-2 ati alpha-7.3 le fa ifasilẹ ti IL-1β nipasẹ inflammasome NLRP3, ati ajesara pẹlu giardines alpha-2 ati alpha-7.3 dinku pathogenicity ti G. duodenalis ninu awọn eku.
Papọ, awọn abajade iwadi yii ni imọran pe giardia alpha-2 ati alpha-7.3 fa iṣeduro ti igbona NLRP3 ogun ati ki o dinku aiṣan ti G. duodenalis ninu awọn eku, ti o jẹ awọn afojusun ti o ni ileri fun idilọwọ giardiasis.
Giardia duodenum jẹ parasite protozoan extracellular ti o ngbe inu ifun kekere ti o si fa 280 milionu awọn ọran ti giardiasis pẹlu igbuuru lododun, paapaa laarin awọn ọmọde kekere ni awọn orilẹ-ede to sese ndagbasoke.Awọn eniyan ni akoran nipasẹ omi mimu tabi ounjẹ ti a ti doti pẹlu M. duodenum cysts, eyi ti o wọ inu ikun ati pe a yọ jade ninu awọn oje inu.Giardia duodenum trophozoites so si duodenal epithelium, nfa ríru, ìgbagbogbo, igbe gbuuru, irora inu, ati àdánù làìpẹ.Awọn ẹni-kọọkan pẹlu ajẹsara ajẹsara ati cystic fibrosis ni ifaragba si ikolu.Ikolu tun le waye nipasẹ ẹnu ati furo ibalopo [2].Awọn oogun bii metronidazole, tinidazole, ati nitazoxanide jẹ awọn aṣayan itọju ti o fẹ fun awọn akoran duodenal [3].Sibẹsibẹ, awọn oogun kimoterapi wọnyi fa awọn ipa ẹgbẹ ti ko dara gẹgẹbi ríru, carcinogenesis, ati genotoxicity [4].Nitorina, awọn ilana ti o munadoko diẹ sii nilo lati ni idagbasoke lati dena ikolu G. duodenalis.
Inflammasomes jẹ kilasi ti awọn eka amuaradagba cytosolic ti o jẹ apakan ti idahun ajẹsara abibi, ṣe iranlọwọ lati daabobo lodi si ikọlu pathogen ati ṣe agbero awọn idahun iredodo [5].Lara awọn inflammasomes wọnyi, oligomerization nucleotide-binding oligomerization (NOD) receptor 3 (NLRP3) oligomerization nucleotide-binding oligomerization (NLRP3) nucleotide-binding-like inflammasome ti ni iwadi lọpọlọpọ nitori pe o le rii nipasẹ ọpọlọpọ awọn ilana molikula ti o ni ibatan si pathogen / bibajẹ (PAMP/ DAMP), ṣe idanimọ, mu eto ajẹsara ti ara ṣiṣẹ.ati pe o ṣe ilana homeostasis oporoku ni ọpọlọpọ awọn arun iredodo [6,7,8].O ni olugba idanimọ apẹẹrẹ (PRR) NLRP3, ohun ti nmu badọgba apoptotic spotted amuaradagba (ASC), ati procaspase ipa-1 tabi procaspase-11.Inflammasome NLRP3 n ṣiṣẹ bi ogun lodi si ikọlu pathogen, bi a ti ṣe akiyesi ni Neospora caninum [9], Paracoccidioides brasiliensis [10], ati awọn ẹkọ Leishmania.[11], ṣugbọn o ti tun royin pe imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome ṣe opin awọn idahun aabo aabo ati mu ilọsiwaju arun buru si, fun apẹẹrẹ, ninu awọn kokoro [12].Da lori awọn awari wa ti tẹlẹ, a royin pe extracellular G. duodenalis nfa imuṣiṣẹ intracellular ti iredodo NLRP3 ati awọn iyipada awọn idahun iredodo ogun nipasẹ fifipamọ awọn vesicles extracellular (EVs) [13].Sibẹsibẹ, ipa ti NLRP3 inflammasome ni G. duodenalis ikolu ni vivo wa lati pinnu.
Giardins ni akọkọ ṣe apejuwe bi awọn ẹya ara ẹrọ ti G. duodenalis cytoskeleton ati ki o ṣe ipa pataki ninu motility trophozoite ati asomọ sẹẹli epithelial ninu ifun kekere.Lati mu dara si ayika ati ki o mu pathogenicity wọn pọ si, G. duodenalis trophozoites ṣe agbekalẹ ilana cytoskeletal alailẹgbẹ ti o ni 8 flagella, 1 ara arin, ati 1 ventral disc [14].Awọn trophozoites ti Giardia duodenum lo cytoskeleton wọn lati wọ inu ifun kekere oke, paapaa duodenum, ati ki o so mọ awọn enterocytes.Wọn nlọ nigbagbogbo ati somọ si awọn sẹẹli epithelial nipa lilo iṣelọpọ sẹẹli.Nitorinaa, ibatan kan wa laarin cytoskeleton wọn ati virulence.Giardines pato fun Giardia duodenum jẹ awọn ẹya ara ti cytoskeleton igbekalẹ [15] ati pe o pin si awọn kilasi mẹrin: α-, β-, γ-, ati δ-giardines.Awọn ọmọ ẹgbẹ 21 wa ti idile α-giardin, gbogbo eyiti o ni agbara ti o gbẹkẹle kalisiomu lati di phospholipids [16].Wọn tun so cytoskeleton pọ mọ awọ ara sẹẹli.Ni awọn ẹni-kọọkan ti o ni gbuuru ti o ṣẹlẹ nipasẹ G. duodenalis, α-giardins jẹ afihan pupọ ati imunoreactive lakoko ikolu [17].Awọn ajesara heterologous ti o da lori Giardia alfa-1 ni aabo lodi si giardiasis ninu awọn eku ati pe o jẹ antigens oludije ti o pọju fun idagbasoke ajesara [18].Alpha-8 giardin, ti agbegbe ni pilasima awo ati flagella, sugbon ko si ni ventral disiki, mu awọn motility ati idagba oṣuwọn ti trophozoites ni G. duodenalis [19].Alpha-14 giardin so mọ awọn ẹya microtubule lori flagella ati ni ipa lori ṣiṣeeṣe ti G. duodenalis [20].Alpha-11 giardine wa lọpọlọpọ ni gbogbo igba igbesi aye, ati ilodi si ti alpha-11 giardine ba G. duodenalis funrarẹ jẹ [21].Sibẹsibẹ, ko ṣe akiyesi boya alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine jẹ aabo lodi si ikolu G. duodenalis ati awọn ilana ti o wa labẹ wọn.
Ninu iwadi yii, recombinant eukaryotic ikosile plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine ti wa ni iyipada si awọn macrophages peritoneal akọkọ ti mouse lati mu NLRP3 alejo ṣiṣẹ.Awọn ibi-afẹde iredodo lẹhinna ṣe ayẹwo.A tun ṣe ayẹwo ipa ti NLRP3 inflammasome ni pathogenicity ti G. duodenalis, ṣe iwadi boya alpha-2 ati alpha-7,3 giardines mu ki o ṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome ni vivo, o si pinnu pe awọn ipa meji wọnyi ti awọn giardines ni ipaniyan ti ipanilara. G. duodenalis.Ibi-afẹde ti o wọpọ ni lati ṣe agbekalẹ awọn ibi-afẹde ti o ni ileri fun idena ti ikolu G. duodenalis.
Iru egan (WT) C57BL/6 eku abo ti ọjọ ori 5–8 ọsẹ ni a ra lati Ile-iṣẹ Eranko Liaoning Changsheng Experimental (Liaoning, China).Awọn eku ni iraye si omi ọfẹ, gba ounjẹ ti a sọ di sterilized ati pe a tọju wọn sinu ina wakati 12/12 / iyipo dudu.Ṣaaju ki o to ni ikolu, awọn eku gba awọn egboogi ad libitum ninu omi mimu ti o ni afikun pẹlu ampicillin (1 mg / mL), vancomycin (1 mg / mL), ati neomycin (1.4 mg / mL) (gbogbo wọn ti a ra lati Shanghai, China, awọn ohun alumọni artificial) [22 ].].Awọn eku ti o padanu agbara lati jẹ ati mimu fun> wakati 24 ti o padanu ≥ 20% iwuwo ara ni a ṣe euthanized ti eniyan nipasẹ ilọkuro cervical.
WB G. duodenalis trophozoites (Akojọpọ Asa Iru Amẹrika, Manassas, AMẸRIKA) ni afikun pẹlu 12.5% ​​omi ara inu oyun (FBS; Gbogbo Green, Zhejiang, China) ati 0.1% bile bovine (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA) ).AMẸRIKA) labẹ awọn ipo microaerobic.Awọn trophozoites confluent ni a gba lori yinyin ati gbigbe ni ipin ti 1: 4 fun ẹda siwaju.
Awọn cysts duodenum Giardia ni a fa bi a ti ṣalaye tẹlẹ [23], awọn trophozoites ti wa ni ikore ni ipele logarithmic ati lẹhinna ti fomi po pẹlu encapsulation inducing alabọde, pH 7.1 (TYI-S-33 ti a ṣe atunṣe) si ifọkansi ikẹhin ti 1 × 106 trophozoites/mL.ifọkansi bile 0.05% alabọde).Awọn trophozoites jẹ gbin labẹ awọn ipo anaerobic ni 37°C titi di ipele idagbasoke logarithmic.Yi awọn alabọde pada si cyst inducing alabọde (pH 7.8; iyipada TYI-S-33 alabọde pẹlu 1% ifọkansi bile) ati asa G. duodenalis ni 37 ° C fun awọn wakati 48-96, lakoko eyi ti a ṣe akiyesi awọn cysts didasilẹ labẹ microscope kan.Lẹhin ti ọpọlọpọ awọn trophozoites ti a ti fa lati dagba cysts, awọn asa adalu ti a ikore ati resuspended ni ifo deionized omi lati lyse awọn ti o ku trophozoites.A ti ka awọn cysts ati ti o fipamọ ni 4°C fun awọn itupalẹ atẹle nipasẹ tube inu ninu awọn eku.
Giardia extracellular vesicles (GEVs) ti ni idarato bi a ti ṣalaye tẹlẹ [13].Awọn Trophozoites ni ipele idagbasoke logarithmic ni a tun daduro ni alabọde TYI-S-33 ti a ti yipada pẹlu FBS ti o dinku-exosome (Awọn ile-iṣẹ Biological, Beit-Haemek, Israeli) si ifọkansi ikẹhin ti 1 × 106 parasites / mL ati ti a fi sii fun awọn wakati 12.ti ya sọtọ lati aṣa ti aṣa nipasẹ centrifugation ni 2000 g fun iṣẹju 10, 10,000 g fun awọn iṣẹju 45, ati 100,000 g fun awọn iṣẹju 60.Awọn itọsi ni tituka ni saline buffered fosifeti (PBS), ni iwọn nipa lilo ohun elo idanwo amuaradagba BCA kan (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ati fipamọ ni -80° C. tabi lo taara fun awọn itupalẹ siwaju.
Awọn macrophages peritoneal eku akọkọ ti pese sile gẹgẹbi a ti ṣalaye tẹlẹ [24].Ni ṣoki, awọn eku (awọn ọjọ ori 6-8 ọsẹ) ni abẹrẹ (intrapereritoneally [ip]) pẹlu 2.5 milimita ti 2.98% Difco olomi thioglycol alabọde (BD, Franklin Lakes, NJ, USA) ati ifunni 3-4 palates.Idaduro ti awọn macrophages ni a gba lati inu iho inu ti awọn eku lẹhin euthanasia ati centrifuged 3 igba ni 1000 g fun 10 min.Awọn sẹẹli ikore ni a rii nipasẹ cytometry ṣiṣan ni lilo ami CD11b titi di mimọ sẹẹli jẹ> 98%, lẹhinna ṣafikun si awọn awo aṣa sẹẹli 6-daradara (awọn sẹẹli 4.5 x 106 / daradara) ati ti a fi sii pẹlu 10% FBS (Bioindustry) ni 37 ° C.ati 5% CO2.
RNA ti jade lati 1 × 107 trophozoites ni 1 milimita ti TRIzol reagent (Vazyme, Nanjing, China), DNA genomic ti jade lati apapọ G. duodenalis RNA nipa lilo MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) ati DNA ti o ni ibamu (cDNA) ni a ṣepọ. lilo MonScript RTIIII Super Mix (Monad) ni ibamu si awọn ilana ti olupese.
Alaye ilana CDS fun ibi-afẹde G. duodenalis pupọ ni a gba lati NCBI GenBank.Lo Alakoko 5.0 lati ṣe apẹrẹ awọn alakoko cloning kan pato fun jiini ibi-afẹde kọọkan.Alakoko iwaju (5'-3′) ni awọn ẹya mẹta: ọna agbekọja pẹlu pcDNA3.1 (+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) ati bẹrẹ awọn codons ATG ati GNN (ti ipilẹ akọkọ kii ṣe G).Eyi ni a ṣe lati mu ilọsiwaju ti ikosile naa dara sii.Ni afikun, o kere ju 16 bp ni idapo awọn ipilẹ (akoonu GC 40–60%/Tm isunmọ. 55 °C).Yiyipada alakoko (5′-3′) oriširiši meji awọn ẹya ara, ohun agbekọja ọkọọkan pẹlu EcoRV-linearized fekito pcDNA3.1 (+) (GCCGCCACTGTGCTGAT) ati ipilẹ apapo ti o kere 16 bp.(ayafi awọn ti o kẹhin meji iduro).awọn ipilẹ) codon gẹgẹbi AA tabi GA lati gba awọn plasmids recombinant lati ṣafihan awọn ọlọjẹ ti o ni aami wọn).Awọn ilana alakoko ti wa ni atokọ ni Tabili 1 ati pe a ṣepọ nipasẹ Kangmet Biotechnology Co., Ltd. (Changchun, China).
Awọn ibi-afẹde ni a pọ si nipa lilo Pfu DNA polymerase (Tiangen, Beijing, China) tabi Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) ni lilo G. duodenalis cDNA ti a pese silẹ gẹgẹbi awoṣe.Awọn ikosile eukaryotic fekito pcDNA3.1(+) jẹ laini ila pẹlu henensiamu ihamọ EcoRV ati dephosphorylated nipa lilo Fast AP (Thermo Fisher Scientific).Awọn ajẹkù pcDNA3.1(+) ti ila ila ati awọn ajẹku jiini ibi-afẹde ni a sọ di mimọ nipa lilo ohun elo isọdọmọ gel DNA kan (Tiangen) ati ni iwọn ni lilo Nanodrop ND-2000 (Thermo Fisher Scientific).Awọn ajẹkù pcDNA3.1 (+) ati ajẹku jiini kọọkan ni a tun ṣepọ pẹlu lilo MonClone adapọ oniye oniye (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) ati timo nipasẹ ilana DNA nipa lilo Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China) ..
Awọn plasmids ti ko ni Endotoxin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 ni a ṣe ni lilo SanPrep Endotoxin-free Plasmid Mini Kit (Sangon Biotech).Ifojusi naa ni itọju loke 500 ng/µl lati rii daju pe EDTA ninu ifipamọ elution ko dabaru pẹlu igbelewọn gbigbe.Awọn macrophages peritoneal mouse akọkọ jẹ gbin ni awọn awo-daradara 6 pẹlu RPMI 1640 alabọde pipe (Awọn ile-iṣẹ Biological) fun awọn wakati 12, lẹhinna a fọ ​​awọn sẹẹli naa ni igba 3 ni PBS gbona lati yọ penicillin ati streptomycin kuro, ati lẹhinna ni alabọde ni afikun pẹlu alabọde pipe.Endotoxin-free plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 (2.5 μg) ni a ti fomi po ni 125 μl ti Opti-MEM dinku alabọde omi ara (Gibco, Thermo Fisher Scientific) ..Lẹhinna 5 µl ti Lipofectamine 2000 reagent gbigbe (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) ti fomi ni 125 µl ti omi kekere Opti-MEM alabọde.Mura awọn eka liposome-DNA nipa didapọ plasmid-ọfẹ endotoxin ti a fomi pẹlu Lipofectamine 2000 ati gbigba adalu laaye lati duro ni iwọn otutu yara fun iṣẹju 5.Gbe awọn eka lọ lọtọ si awọn sẹẹli ni kanga kọọkan ki o dapọ laiyara.Lẹhin awọn wakati 4, alabọde aṣa sẹẹli ti rọpo pẹlu 2 milimita ti alabọde RPMI 1640 pipe ati aṣa ti tẹsiwaju fun awọn wakati 24.Alabọde aṣa sẹẹli tuntun ni a ṣafikun si awọn sẹẹli ati ki o ṣabọ fun ọpọlọpọ awọn aaye akoko da lori apẹrẹ idanwo.
Awọn ayẹwo amuaradagba lati awọn supernatants ati awọn lysates sẹẹli ni a pese sile gẹgẹbi a ti ṣalaye tẹlẹ [25].Awọn aye gbigbe Membrane fun pro-IL-1β, pro-caspase-1, caspase-1 p20, NLRP3, β-actin, ati Tag Rẹ jẹ 200 mA/90 min.Fun interleukin 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-1 (p20) (Adipogen, Siwitsalandi) ati NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, Switzerland) ati 1: 5000 ti o fojusi tag Rẹ (Amylet Scientific, Wuhan, China) ati β-actin (Proteintech, Wuhan, China).
Isopọmọ agbelebu pẹlu disuccinimide suberate (DSS) ni a ṣe gẹgẹbi a ti ṣalaye tẹlẹ [26].A fọ awọn sẹẹli ni igba 3 pẹlu PBS tutu ati pe o ni kikun pẹlu abẹrẹ 27 kan ni 50 µl ASC ipadanu ifasilẹ (pH 8.0) ti o ni 25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES ati 125 mM NaHCO3.A ti fi adalu naa si centrifuged ni 5000 g fun iṣẹju 3 ati pellet ti wa ni sutured pẹlu 10 µl DSS (25 mM ni DMSO) ati 40 µl ASC ipadanu fun iṣẹju 30 ni 37°C.Lẹhin centrifugation ni 5000 g fun iṣẹju 10, pellet ti ni tituka ni ojutu kan ti 40 µl ti saarin ifura ASC ati 10 µl ti ifipamọ ikojọpọ amuaradagba 6x (TransGen, Beijing, China), ati lẹhinna ojutu naa ti pa ni iwọn otutu yara fun 15 min., Lẹhinna sise iṣẹju 10.Awọn ayẹwo amuaradagba lẹhinna ni a tẹriba si didi Oorun nipa lilo awọn aporo anti-ASC akọkọ (Wanleibio, Shenyang, China) ni ipin dilution ti 1:500.
Ni atẹle ilana ti a ti ṣalaye tẹlẹ [13], awọn alabojuto aṣa sẹẹli ni ikore ati yomijade ti cytokine pro-inflammatory IL-1β ti pinnu nipa lilo ohun elo IL-1 Beta ELISA Asin (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific).Ṣe iyipada awọn iye OD450nm si awọn ifọkansi amuaradagba ni lilo ọna iwọn boṣewa IL-1β.
Awọn sẹẹli ti a bo lori awọn ideri jẹ rọra fo ni igba mẹta ni PBS ti o gbona, ti o wa titi ni fixative cell tissue (Biosharp, Beijing, China) fun awọn iṣẹju 10 ni iwọn otutu yara (RT), ni 0.1% Triton X-Permeabilize ni 100 (ti fomi ni PBS; Biosharp). ) fun iṣẹju 20 ni iwọn otutu yara ati dènà ni 5% bovine serum albumin (ni PBS) fun wakati 2 ni iwọn otutu yara.Awọn sẹẹli lẹhinna ni idawọle ni alẹ kan ni 4°C pẹlu awọn egboogi akọkọ lodi si ASC (1:100 dilution) tabi NLRP3 (1:100 dilution), lẹsẹsẹ, ati Cy3 ti a pe ni ewurẹ egboogi-ehoro IgG (H + L) (1:400; EarthOx , San Francisco, CA, USA) tabi FITC-conjugated ewúrẹ egboogi-eku IgG (1:400; Earthox) moju ni 37 ° C ni dudu fun 1 wakati.Awọn ekuro ti wa ni abawọn pẹlu Hoechst 33258 (10 μg / ml; UE, Suzhou, China) fun awọn iṣẹju 5 ati ki o ṣe akiyesi labẹ microscope fluorescence (Olympus Corporation, Tokyo, Japan).
A pin awọn eku si awọn ẹgbẹ mẹrin (n = 7 ni ẹgbẹ kọọkan): (i) Ẹgbẹ iṣakoso odi ti a ṣe itọju PBS (PBS nikan; gavage 100 µl/mouse PBS ti o tẹle pẹlu abẹrẹ intraperitoneal ojoojumọ 100 µl/mouse PBS 3 wakati nigbamii) .lemọlemọfún fun awọn ọjọ 7);(ii) ẹgbẹ iṣakoso odi ti a tọju pẹlu inhibitor MCC950 [27] (100 µl / Asin nipasẹ PBS gavage, 3 wakati nigbamii, 10 mg/kg iwuwo ara [BW] MCC950 [ni PBS] ni a nṣakoso intraperitoneally lojoojumọ, iye akoko 7 ọjọ);(iii) G. duodenalis cyst ikolu ẹgbẹ (1.5 x 106 cysts / Asin nipasẹ gavage, 3 wakati nigbamii, 100 μl / Asin PBS intraperitoneally ti a nṣakoso ni ojoojumọ fun awọn ọjọ 7);(iv) G. duodenalis cyst ni idapo ikolu ẹgbẹ MCC950 inhibitor itọju ẹgbẹ (1.5 × 106 cysts / Asin nipasẹ gavage, 10mg / kg iwuwo ara MCC950 intraperitoneally ojoojumọ fun awọn ọjọ 7 ni 3h).Iwọn ara ti Asin kọọkan ni a ṣe abojuto lojoojumọ ati pe gbogbo awọn eku jẹ euthanized ni ọjọ 7th.Duodenum ikore (3 cm gigun) ti ge si awọn ege kekere ni 1 milimita PBS, awọn cysts ti run ni alẹ ni PBS ni 4 ° C, ati G. duodenalis trophozoites.Duodenum tuntun (1 cm gigun) ti ya sọtọ fun hematoxylin ati eosin (H&E) abawọn.
A pin awọn eku si awọn ẹgbẹ meji: (i) Ẹgbẹ iṣakoso MOCK ati (ii) ẹgbẹ inhibitor MCC950.Awọn itọju marun wa ni ẹgbẹ kọọkan (n = 7 / ẹgbẹ itọju): (i) itọju PBS ẹgbẹ iṣakoso odi (PBS nikan; 100 µl / mouse PBS, intramuscular (IM) injection (tibialis anterior) [28, 29];( ii) pcDNA3.1 (+) ẹgbẹ iṣakoso odi plasmid (100 µg / DNA mouse, nipasẹ abẹrẹ inu iṣan); Ẹgbẹ ti a tọju pẹlu pcDNA3.1 plasmid (+) -alpha-2 (100 μg/Asin DNA, nipasẹ abẹrẹ inu iṣan), ati (v) ẹgbẹ kan ti a tọju pẹlu pcDNA3.1 (+) plasmid (+) - alpha-7.3 (100 µg/mouse). DNA, lẹhin awọn wakati 12 ti gbigbe, awọn eku ni ẹgbẹ inhibitor MCC950 gba abẹrẹ intraperitoneal ojoojumọ ti MCC950 (10 mg / kg iwuwo ara) fun awọn ọjọ 7, lakoko ti awọn eku ni ẹgbẹ MOCK gba iwọn deede ti itọju PBS. Awọn ayẹwo ẹjẹ jẹ Ti a gba lati awọn eku oju ati fi silẹ ni alẹ ni 4 °C awọn ayẹwo Serum ni a ya sọtọ nipa lilo imunosorbent assay (ELISA) ti o ni asopọ fun ati awọn iwọn IL-1β.
Eku marundinlogoji ni a pin si ẹgbẹ marun (n=7/ẹgbẹ).Ẹgbẹ 1 jẹ ẹgbẹ iṣakoso odi ti a tọju pẹlu PBS: awọn eku gba 100 μl ti PBS intramuscularly ati awọn ọjọ 3 lẹhinna nipasẹ gavage.Ẹgbẹ 2 jẹ ẹgbẹ iṣakoso rere ti o ni arun pẹlu G. duodenalis cysts: awọn eku ti wa ni itasi pẹlu 100 μl ti PBS, ati awọn ọjọ 3 lẹhinna 1.5 x 106 cysts / Asin ni abẹrẹ intragastrically.Ẹgbẹ kẹta - ajẹsara plasmid pẹlu pcDNA3.1 (+) ni apapo pẹlu ẹgbẹ iṣakoso fun ikolu cyst duodenal: awọn eku gba 100 μg ti DNA plasmid pcDNA3.1 (+) (im) orally, 1.5 × 106 cysts / mouse 3 fun ọpọlọpọ awọn ọjọ.Awọn ẹgbẹ 4 ati 5 jẹ atunṣe pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine plasmid tabi pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine plasmid ni apapo pẹlu G. duodenalis cyst infection.Ẹgbẹ adanwo: eku gba 100 μg ti pcDNA3.1 (+) -giardine plasmid DNA (im), lẹhinna 3 ọjọ lẹhinna, 1.5 × 106 cysts / mouse ti wa ni itasi nipasẹ gavage.Iwọn ara ti Asin kọọkan ni a ṣe abojuto lẹhin iṣafihan G. duodenalis cyst nipasẹ tube.Duodenum tuntun ni a gba fun awọn wiwọn fifuye parasitic ati itupalẹ abawọn HE.
Awọn iyipada itan-akọọlẹ ni a ṣe atupale gẹgẹbi ilana ti a tẹjade tẹlẹ [30].Duodenum tuntun ti wa titi pẹlu atunṣe sẹẹli tissu, ti a fi sinu paraffin, ge si awọn apakan 4 μm, ti o ni abawọn pẹlu H&E ati itupalẹ labẹ microscope ina.Aṣoju awọn iyipada pathological ni awọn apakan àsopọ meje lati awọn eku olominira meje ni a ṣe ayẹwo nipasẹ onimọ-jinlẹ ti ko mọ itọju naa ati pe wọn mu ni igbega 200x.Gigun villi ati ijinle awọn crypts ni a ṣe iwọn ni ibamu pẹlu awọn ọna ti a ti ṣalaye tẹlẹ.
Awọn abajade in vitro ati in vivo ni a gba ni ẹẹta mẹta.Awọn aworan ti ipilẹṣẹ nipa lilo GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA).Awọn iyatọ laarin awọn ẹgbẹ meji ni a ṣe ayẹwo nipasẹ t-idanwo, lakoko ti awọn iyatọ laarin awọn ẹgbẹ ≥3 ni a ṣe ayẹwo nipasẹ ọna-ọna kan ti iyatọ (ANOVA) nipa lilo software SPSS (ẹya 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA).A ṣe atupale data fun isokan ti iyatọ nipa lilo idanwo Levene ti o tẹle nipasẹ idanwo hoc post Bonferroni (B).A ṣe afihan pataki bi P <0.05, P<0.01, ati P<0.001 (kii ṣe pataki [ns]) (P> 0.05).
Iwadii iṣaaju wa ti awọn proteomics GEV ni Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) fihan pe ọpọlọpọ awọn ibi-afẹde le ni ipa ninu imuṣiṣẹ ti awọn ipa ọna ifihan iredodo [13].A yan awọn ibi-afẹde meji ti o ni ileri, alpha-2 ati alpha-7.3 giardins, mu awọn ohun elo wọnyi pọ ki o lo wọn lati ṣe agbero pcDNA3.1(+) ikosile eukaryotic fekito.Lẹhin titele, recombinant pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati alpha-7.3 giardine ikosile plasmids ti wa ni gbigbe sinu akọkọ Asin peritoneal macrophages, ati awọn caspase-1 p20 amuaradagba ibuwọlu ti iredodo (ajeku ti mu ṣiṣẹ caspase-1) ni a mọ. bi awọn ohun elo bọtini ti n ṣalaye ti o le fa igbona.Awọn abajade fihan pe alpha-2 ati alpha-7.3 giardines le fa ikosile p20 caspase-1 bii GEV.Ko si ipa lori imuṣiṣẹ caspase-1 ni iṣakoso odi ti ko ni itọju (PBS nikan) ati pcDNA3.1 (+) iṣakoso plasmid (Figure 1).
Wiwọn ti p20 caspase-1 imuṣiṣẹ nipasẹ pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati alpha-7.3 giardins.Recombinant eukaryotic ikosile plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati alpha-7.3 giardines (loke kọọkan ona) won gbigbe sinu jc eku peritoneal macrophages ati asa supernatants won kore 24 wakati nigbamii.Ti lo didi Oorun lati wiwọn awọn ipele ikosile ti kaspase ibuwọlu-1 p20 amuaradagba inflammasome.Ẹgbẹ itọju PBS-nikan (lane C) ati pcDNA3.1 (+) ẹgbẹ monotherapy (pcDNA3.1 lane) ni a lo bi iṣakoso odi, ati pe ẹgbẹ itọju GEV ti lo bi iṣakoso rere.Ikosile ti amuaradagba ti o tun pada jẹ timo nipa wiwa tag histidine ninu amuaradagba kọọkan, ati awọn ẹgbẹ amuaradagba ti a reti ni alpha-2 giardine (38.2 kDa) ati alpha-7.3 giardine (37.2 kDa).GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-linearized fector, SUP, supernatant
Lati pinnu boya alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine fa p20 caspase-1 ikosile ati ki o mu ipa kan ṣiṣẹ ni mimuuṣiṣẹpọ ogun NLRP3 inflammatory esi, pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine ati pcDNA3.1 (+) -alpha -7.3 giardin ti wa ni iyipada si awọn macrophages peritoneal mouse akọkọ pẹlu DNA plasmid recombinant, ati awọn ipele ti ikosile, isọdi agbegbe, ati oligomerization ti awọn ọlọjẹ inflammatory bọtini NLRP3 ti pinnu.Ninu idanwo yii, GEV ti lo bi ẹgbẹ iṣakoso rere, ati pe ko si ẹgbẹ itọju (PBS nikan) tabi ẹgbẹ itọju gbigbe pcDNA3.1 (+) jẹ ẹgbẹ odi.Awọn abajade fihan pe, gẹgẹbi ninu ẹgbẹ GEV, DNA plasmid recombinant ti giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ati giardin pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 yorisi iṣeduro ti NLRP3, pro-IL-1β ati procaspase-1 ati caspase-1 imuṣiṣẹ (Fig. 2a).Ni afikun, awọn giardine mejeeji ṣe ifasilẹ IL-1β pataki (pcDNA3.1: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0007 ).;alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F (4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (Aworan 2b).Pupọ julọ awọn ọlọjẹ ASC jẹ monomeric ni ẹgbẹ ti kii ṣe itọju tabi ni ẹgbẹ itọju ti o yipada pẹlu pcDNA3.1 (+) plasmid, ni idakeji si pcDNA3.1 (+) -alpha-2 tabi pcDNA3.1 (+) -alpha- 7,3 giardini.ASC oligomerization waye ninu DNA plasmid recombinant ti ẹgbẹ iṣakoso rere GEV tabi ẹgbẹ, ti o nfihan fọọmu oligomeric kan (Figure 2c).Awọn data alakoko wọnyi daba pe alpha-2 giardine ati alpha-7,3 giardine le fa imuṣiṣẹ iredodo NLRP3.Awọn ijinlẹ imunofluorescent ti o tẹle ti agbegbe ti ASC ati NLRP3 fihan pe ninu ẹgbẹ iṣakoso odi, amuaradagba ASC ti tuka jakejado cytoplasm ati pe o han bi aami aami kan lori imudara ti pcDNA3.1 (+) -alpha-2 pẹlu giardine tabi pcDNA3.1 (+) -alpha-7,3 ẹgbẹ giardine tabi ẹgbẹ iṣakoso rere GEV (Figure 2d).Ninu iṣakoso odi ati awọn ẹgbẹ pcDNA 3.1 ti a ṣe itọju plasmid, a ko rii ifihan agbara amuaradagba NLRP3, lakoko ti aami ifihan fluorescent ni idahun si pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine tabi pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 a ti ri..Giardine ni a rii ni cytoplasm tabi lori iwuri ti HEV (Fig. 2e).Awọn data wọnyi tun ṣe afihan pe G. duodenalis giardin alpha-2 ati giardin alpha-7.3 mu NLRP3 inflammasome ṣiṣẹ ni awọn macrophages peritoneal akọkọ mouse.
pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardin ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardin mu NLRP3 inflammasome ṣiṣẹ ni awọn macrophages peritoneal mouse.Yipada ikosile eukaryotic recombinant plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardin ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardin sinu murine peritoneal macrophages ati awọn sẹẹli, tabi ikore supernatant laarin 24 h fun igbekale ti ikosile, oligomerization , asiri.ati agbegbe ti awọn ọlọjẹ iredodo bọtini.Ẹgbẹ PBS-nikan (C) ati pcDNA3.1 (+) ẹgbẹ itọju kan ni a lo bi iṣakoso odi, ati pe ẹgbẹ itọju GEV ti lo bi ẹgbẹ rere.a Key inflammatory proteins NLRP3, pẹlu NLRP3, pro-IL-1β, pro-caspase-1, ati p20 caspase-1, ni a ri nipasẹ Western blotting.b Awọn ipele ti yomijade ti IL-1β ninu awọn alamọdaju ni a pinnu nipa lilo imunosorbent assay ti o ni asopọ enzyme (ELISA).Awọn iyatọ laarin iṣakoso ati awọn ẹgbẹ adanwo ni a ṣe atupale nipasẹ itupalẹ ọna kan ti iyatọ (ANOVA) nipa lilo ẹya sọfitiwia SPSS 22.0.Awọn ami akiyesi ṣe afihan awọn iyatọ nla laarin awọn ẹgbẹ ** P <0.01 ati *** P <0.001.c Awọn ipele oligomerization ASC ni awọn pellets ni ipinnu nipasẹ DSS iṣiro-ọna asopọ agbelebu, lakoko ti awọn ipele ASC ni awọn lysates sẹẹli ni a lo bi iṣakoso ikojọpọ.d Iwoye ti agbegbe ISC nipa lilo imunofluorescence.e Immunofluorescence ni a lo lati ṣe akiyesi agbegbe ti NLRP3.ASC, apoptotic speck-bi amuaradagba;IL, interleukin;NLRP3, nucleotide-binding oligomerization-like receptor 3;ns, kii ṣe pataki (P> 0.05)
Mejeeji G. duodenalis ati awọn GEVs ti o ṣe aṣiri mu NLRP3 inflammasome ṣiṣẹ ati ṣe ilana awọn idahun iredodo ogun ni vitro.Bayi, ipa ti NLRP3 inflammasome ni pathogenicity ti G. duodenalis ko ṣiyemeji.Lati ṣe iwadii ọran yii, a ṣe apẹrẹ idanwo laarin awọn eku ti o ni arun G. duodenalis cyst ati awọn eku ti o ni arun G. duodenalis cyst + MCC950 inhibitor itọju ati ki o ṣe afiwe ikosile inflammasome NLRP3 nigba ti o ni arun G. duodenalis cyst.Eto alaye ti idanwo naa han ni aworan 3a.Awọn iyipada ninu iwuwo ara ti awọn eku ni awọn ẹgbẹ itọju ti o yatọ ni a ṣe abojuto fun awọn ọjọ 7 lẹhin ikolu pẹlu cysts, ati awọn esi ti han ni 3b.Ti a bawe si ẹgbẹ ti a tọju pẹlu PBS mimọ, awọn abajade fihan pe (i) iwuwo ara ti awọn eku ti o ni arun G. duodenalis cyst dinku lati ọjọ 3 si ọjọ 7 lẹhin ikolu;(ii) itọju pẹlu MCC950 inhibitor ko ni ipa pataki lori iwuwo ara ti awọn eku..Ti a ṣe afiwe si ẹgbẹ ikọlu kan, BW ti ẹgbẹ ikolu duodenal ti a tọju pẹlu MCC950 dinku si awọn iwọn oriṣiriṣi (Ọjọ 1: ANOVA, F (3, 24) = 1.885, P = 0.0148; Ọjọ 2: ANOVA, F (3, 24) ) = 0.4602, P <0.0001; Ọjọ 3: ANOVA, F (3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; Ọjọ 4: ANOVA, F (3, 24) = 1.683, P = 0.0052; F (3, 24) = 0.6497, P = 0.0645; Ọjọ 6: ANOVA, F (3, 24) = 5.457, P = 0.0175; Ọjọ 7: ANOVA, F (3, 24) = 2.893, P = 0.0202).Awọn data wọnyi ṣe afihan pe NLRP3 inflammasome ṣe aabo awọn eku lati pipadanu iwuwo pataki ni awọn ipele ibẹrẹ (2-4 ọjọ) ti ikolu duodenal.Lẹhinna a ṣe ifọkansi lati rii G. duodenalis trophozoites ni ito lavage duodenal ati awọn abajade ti han ni Figure 3c.Ti a ṣe afiwe si ẹgbẹ G. duodenalis cyst cyst, nọmba awọn trophozoites ti o wa ninu duodenum pọ si pupọ lẹhin ti o ti dina NLRP3 inflammasome (t (12) = 2.902, P = 0.0133).Duodenal tissues ti o ni abawọn pẹlu HE fihan, ni akawe si iṣakoso odi ti a tọju pẹlu PBS ati MCC950 nikan: (i) G. duodenalis cyst ikolu yorisi ibajẹ si villi duodenal (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P= 0.0488 ) ati crypt atrophy (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) duodenum lati awọn eku ti o ni arun G. duodenalis cysts ati pe a ṣe itọju pẹlu awọn inhibitors MCC950.duodenal villi ti bajẹ ati okú (ANOVA, F (3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) pẹlu atrophy ati crypt branching (ANOVA, F (3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (Fig. 3d- f) .Awọn abajade wọnyi ni imọran pe NLRP3 inflammasome ṣe ipa kan ni idinku awọn pathogenicity ti G. duodenalis.
Ipa ti NLRP3 inflammasome ni akoran duodenum Giardia.Awọn eku ti wa ni gavaged (iv) pẹlu awọn cysts duodenococcal ati lẹhinna ṣe itọju pẹlu tabi laisi MCC950 (ip).Awọn ẹgbẹ itọju ẹyọkan pẹlu PBS tabi MCC950 ni a lo bi awọn idari.Ẹgbẹ idanwo ati ilana itọju.b Iwọn ara ti awọn eku ni ọkọọkan awọn oriṣiriṣi awọn ẹgbẹ itọju ni a ṣe abojuto fun awọn ọjọ 7.Iyatọ laarin ẹgbẹ ikolu G. duodenalis ati G. duodenalis + MCC950 ẹgbẹ itọju ikolu ni a ṣe ayẹwo nipasẹ t-idanwo nipa lilo SPSS software version 22.0.Awọn ami akiyesi ṣe afihan awọn iyatọ pataki ni * P <0.05, ** P <0.01, tabi *** P <0.001.c Ẹru parasitic jẹ ipinnu nipasẹ kika nọmba awọn trophozoites ni ito lavage duodenal.Iyatọ laarin ẹgbẹ ikolu G. duodenalis ati G. duodenalis + MCC950 ẹgbẹ itọju ikolu ni a ṣe ayẹwo nipasẹ t-idanwo nipa lilo SPSS software version 22.0.Asterisks tọkasi awọn iyatọ pataki ni * P <0.05.d Hematoxylin ati eosin (H&E) awọn abajade idoti ti histopathology duodenal.Awọn ọfa pupa tọkasi ibaje si villi, awọn ọfa alawọ ewe tọkasi ibajẹ si awọn crypts.Pẹpẹ iwọn: 100 µm.e, f Iṣiro iṣiro ti giga villus duodenal ati giga crypt giga.Asterisks tọkasi awọn iyatọ pataki ni * P <0.05 ati ** P <0.01.Awọn esi ti wa ni ya lati 7 ominira ti ibi adanwo.BW, iwuwo ara;ig, intragastric ọna ifijiṣẹ;ip, ipa ọna ifijiṣẹ intraperitoneal;ns, kii ṣe pataki (P> 0.05);PBS, iyo fosifeti buffered;WT, egan iru
Ifiranṣẹ ti IL-1β jẹ ami iyasọtọ ti imuṣiṣẹ igbona.Lati pinnu boya G. duodenalis alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine mu NLRP3 ogun inflammasome ṣiṣẹ ni vivo, a lo awọn eku WT ti ko ni itọju (ẹgbẹ sham) ati NLRP3 inflammasome-blocked eku (MCC950 inhibited itọju ẹgbẹ).Eto alaye ti idanwo naa han ni aworan 4a.Awọn ẹgbẹ idanwo ni awọn eku ti a tọju pẹlu PBS, G. duodenalis cyst itọju nipasẹ gavage, intramuscular injection of pcDNA3.1, ati intramuscular injection of pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine tabi pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine.Ni ọjọ 7th lẹhin iṣakoso intramuscular ti plasmid recombinant, a ti gba omi ara ati ipele ti IL-1β ni ẹgbẹ kọọkan ti pinnu.Gẹgẹbi a ṣe han ni Nọmba 4b, ninu ẹgbẹ MOCK: (i) ni akawe si ẹgbẹ PBS, itọju pcDNA3.1 ko ni ipa pataki lori yomijade IL-1β (ANOVA, F (4.29) = 4.062, P = 0.9998), sibẹsibẹ, Ifiweranṣẹ IL-β ni pataki ni G. duodenalis cyst ẹgbẹ (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine ati pcDNA3.1- Intramuscular injection of alpha-7.3 giardine significantly pọ omi ara IL-1β awọn ipele (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P <0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine ti fa awọn ipele giga ti IL -1β yomijade ninu pcDNA3.1-alpha-2 giardine intramuscular injection group (ANOVA, F (4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .Ti a bawe pẹlu ẹgbẹ kọọkan ninu ẹgbẹ itọju MCC950 ati ẹgbẹ MOCK: (i) Awọn ipele ifasilẹ IL-1β ninu ẹgbẹ iṣakoso PBS ati ẹgbẹ iṣakoso pcDNA3.1 dinku si iye kan lẹhin ti o ti dina MCC950 inhibitor, ṣugbọn iyatọ kii ṣe pataki (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) lẹhin idinamọ MCC950., IL-1β yomijade ti dinku ni pataki ni G. duodenalis cyst-infected group, pcDNA3.1-alpha-2 giardine group, ati pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine group (G. duodenalis: ANOVA, F (9) , 58) = 3.540, P = 0.0120; pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.0447; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F ) = 3.540, P = 0.0164).Awọn abajade wọnyi daba pe alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine ṣe agbedemeji imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome ni vivo.
pcDNA3.1 (+) -giardines mu NLRP3 ogun inflammasome ṣiṣẹ ni vivo.Awọn eku ni ajẹsara (IM) pẹlu ikosile eukaryotic recombinant plasmid pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine tabi pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 giardine ati lẹhinna ṣe itọju pẹlu MCC950 (ip; MCC950 ẹgbẹ) tabi rara (ẹgbẹ dummmy). ).PBS tabi pcDNA3.1 (+) ẹgbẹ itọju plasmid ni a lo bi iṣakoso odi, G. duodenalis cyst itọju ẹgbẹ ti a lo bi iṣakoso rere.Ẹgbẹ idanwo ati ilana itọju.b Awọn ipele Serum ti IL-1β ninu awọn eku ni a wọn ni ọjọ 7 nipasẹ ayẹwo ELISA.Awọn iyatọ laarin awọn ẹgbẹ ni ẹgbẹ MOCK ni a ṣe atupale nipa lilo ANOVA-ọna kan, ati awọn iyatọ laarin ẹgbẹ MOCK ati ẹgbẹ MCC950 ni a ṣe atupale nipa lilo t-idanwo ti ẹya sọfitiwia SPSS 22.0.Asterisks ṣe afihan awọn iyatọ nla laarin awọn ẹgbẹ itọju ni ẹgbẹ MOCK, * P <0.05 ati *** P <0.001;awọn ami dola ($) tọkasi awọn iyatọ pataki laarin ẹgbẹ kọọkan ninu ẹgbẹ MOCK ati ẹgbẹ MCC950 ni P<0.05.Awọn abajade ti awọn adanwo ti ibi ominira meje.i, abẹrẹ inu iṣan, ns, kii ṣe pataki (P> 0.05)
Lati ṣe iwadii ipa ti alpha-2 ati alpha-7.3 giardine-mediated activation ti NLRP3 ogun inflammasome lori G. duodenalis infectivity, a lo WT C57BL / 6 eku ati itasi alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine.plasmid ti wa ni itasi intramuscularly, lẹhin awọn ọjọ 3 nipasẹ tube ikun ti G. duodenalis cyst, lẹhin eyi ti a ṣe akiyesi awọn eku fun awọn ọjọ 7.Eto alaye ti idanwo naa han ni aworan 5a.Iwọn ara ti Asin kọọkan ni a wọn ni gbogbo ọjọ, awọn ayẹwo ti awọ-ara duodenal tuntun ni a gba ni ọjọ 7th lẹhin iṣakoso nipasẹ tube ikun, nọmba awọn trophozoites ni a ṣe iwọn, ati awọn iyipada ti itan-akọọlẹ ni a ṣe akiyesi.Gẹgẹbi a ṣe han ni Nọmba 5b, pẹlu akoko jijẹ jijẹ, BW ti awọn eku ni ẹgbẹ kọọkan n pọ si diẹdiẹ.MT ti awọn eku bẹrẹ si dinku ni ọjọ 3rd lẹhin iṣakoso intragastric ti G. duodenalis cysts, ati lẹhinna pọ si ni ilọsiwaju.Imuṣiṣẹ ti inflammasome NLRP3 ti o fa nipasẹ abẹrẹ intramuscular ti alpha-2 giardine ati alpha7.3 giardine ṣe pataki idinku iwuwo ninu awọn eku (Ọjọ 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0 .9754 Ọjọ 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 1.399, P = 0.9987 Ọjọ 2: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F ( 4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; Ọjọ 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.3172, P = 0.8409; Ọjọ 3: pcDNA3.1-alpha-2, F 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 Ọjọ 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.8222, P = 0.0083; Ọjọ 4: pcDNA3.1-alpha-2 giardine , F (4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, Ọjọ 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5620, P <0.0001, Ọjọ 5: pcDNA3.1-alpha - 2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Ọjọ 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.9728, P <0.0001 Ọjọ 6: pcDNA3 . alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, Ọjọ 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;Ọjọ 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5369, P<0.0001 Ọjọ 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F (4, 30) = 0.5369, P <0.0001).A ṣe ayẹwo fifuye parasitic ni duodenum (Fig. 5c).Ti a ṣe afiwe si iṣakoso rere ti ko ni itọju ati ẹgbẹ ti a fi sii pẹlu pcDNA3.1 vector ofo, nọmba G. duodenalis trophozoites ti dinku ni pataki ninu awọn ẹgbẹ ti a fi sii pẹlu α-2 giardine ati α-7,3 giardine (pcDNA3.1-alpha) -2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P <0.0001).Ni afikun, giardine alfa-7.3 jẹ aabo diẹ sii ninu awọn eku ju giardine alfa-2 (ANOVA, F (3, 24) = 1.209, P = 0.0081).Awọn abajade ti abawọn HE ti han ni ọpọtọ.5d–f.Awọn eku ti a fi itọsi pẹlu alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine ni awọn ọgbẹ tissu duodenal diẹ, ti o farahan nipasẹ ibajẹ villus, ni akawe si awọn eku ti a fi itọsi pẹlu G. duodenalis ati awọn eku ti a fi sii pẹlu G. duodenalis ni apapo pẹlu pcDNA3 vector .1 Zoom ti o ṣofo.(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 2.466, P = 0.0035 tabi P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 2.466, P = 0.0028 tabi P = 0.0055) ati idinku crypt atrophy (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F (3, 24) = 1.470, P = 0.0264 tabi P = 0.0158; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine , F (3, 24) = 1.470, P = 0.0371 tabi P = 0.0191).Awọn abajade wọnyi daba pe alpha-2 giardine ati alpha-7,3 giardine dinku infectivity ti G. duodenalis nipa ṣiṣe NLRP3 inflammasome ni vivo.
Ipa ti pcDNA3.1 (+) -giardins ni G. duodenalis ikolu.Awọn eku ni ajẹsara (IM) pẹlu recombinant eukaryotic expression plasmids pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine tabi pcDNA3.1 (+) - alpha-7.3 giardine ati lẹhinna koju pẹlu G. duodenalis cysts (ig).Ẹgbẹ PBS ati pcDNA3.1 (+) + ẹgbẹ itọju cyst duodenal ni a lo bi awọn ẹgbẹ iṣakoso odi, ati pe ẹgbẹ itọju cyst duodenal ni a lo bi ẹgbẹ iṣakoso rere.Ẹgbẹ idanwo ati ilana itọju.b Awọn MT ti awọn eku ni ọkọọkan awọn oriṣiriṣi awọn ẹgbẹ itọju ni a ṣe abojuto fun awọn ọjọ 7 lẹhin-ipenija.Asterisks ṣe afihan awọn iyatọ pataki laarin awọn ẹgbẹ ni G. duodenalis ẹgbẹ ati pcDNA3.1 (+) -alpha-2 ẹgbẹ giardine, * P <0.05, ** P <0.01, ati *** P <0.001;ami dola ($) tọkasi iyatọ nla laarin ẹgbẹ kọọkan ti G. duodenalis ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 jardine ẹgbẹ, $$P <0.01 ati $$$P <0.001.c Ẹru parasitic ti pinnu nipasẹ kika nọmba awọn trophozoites ni 1 milimita ti lavage duodenal lati duodenum (igun cm 3) ati ti a fihan bi nọmba awọn parasites fun cm ti duodenum.Awọn iyatọ laarin ẹgbẹ G. duodenalis ikolu, pcDNA3.1 (+) -alpha-2 giardine group, ati pcDNA3.1 (+) -alpha-7.3 ẹgbẹ giardine ni a ṣe ayẹwo nipasẹ ọna kan ANOVA nipa lilo SPSS software version 22.0.Asterisks tọkasi awọn iyatọ pataki ni **P<0.01 ati ***P<0.001.d Awọn iyipada histopathological ninu duodenum.Awọn ọfa pupa tọkasi ibaje si villi, awọn ọfa alawọ ewe tọkasi ibajẹ si awọn crypts.Pẹpẹ iwọn: 100 µm.e, f Iṣiro iṣiro ti Asin duodenal villus giga (e) ati giga crypt (f).Awọn iyatọ laarin awọn ẹgbẹ ni Nọmba 1d ni a ṣe atupale nipasẹ ọna kan ANOVA nipa lilo ẹya sọfitiwia SPSS 22.0.Asterisks tọkasi awọn iyatọ pataki ni * P <0.05 ati ** P <0.01.Awọn abajade ti awọn adanwo ti ibi ominira meje.ns, kii ṣe pataki (P> 0.05)
Giardia duodenum jẹ parasite inu ifun ti a mọ daradara ti eniyan ati awọn ẹranko miiran ti o fa giardiasis.Ni ọdun 2004, o wa ninu ipilẹṣẹ Arun Aibikita ti WHO nitori itankalẹ giga rẹ ni ọdun 6, paapaa ni awọn agbegbe ti ipo eto-ọrọ aje kekere [32].Eto ajẹsara innate ṣe ipa pataki ninu esi ajẹsara si ikolu G. duodenalis.A ti royin awọn macrophages Asin lati gba ati pa G. duodenalis nipa jijade awọn ẹgẹ extracellular [33].Awọn ijinlẹ wa ti tẹlẹ ti fihan pe G. duodenalis, parasite ti kii ṣe invasive extracellular, mu ṣiṣẹ p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, ati awọn ọna itọsi gbigbona NLRP3 ni awọn macrophages mouse lati ṣe ilana awọn idahun iredodo ogun, ati tu GEV le mu ilana yii pọ si.13], 24].Sibẹsibẹ, awọn PAMP gangan ti o ni ipa ninu NLRP3 inflammasome-regulated inflammation ni GEV ati ipa ti NLRP3 inflammasome ni giardiasis wa lati wa ni alaye.Nado mọnukunnujẹ kanbiọ awe ehelẹ ji, mí deanana oplọn ehe.
Inflammasome NLRP3 wa ninu cytoplasm ti awọn sẹẹli ajẹsara ati pe o le muu ṣiṣẹ nipasẹ ọpọlọpọ awọn patikulu gẹgẹbi awọn kirisita uric acid, majele, kokoro arun, awọn ọlọjẹ, ati awọn parasites.Ninu awọn ijinlẹ kokoro-arun, awọn majele ti jẹ idanimọ bi awọn PAMPs bọtini ti o mu awọn sensọ iredodo ṣiṣẹ, ti o yori si iredodo ati iku sẹẹli [34].Diẹ ninu awọn majele ti o yatọ ti igbekale, gẹgẹbi hemolysin lati Staphylococcus aureus [35] ati Escherichia coli [36], hemolysin BL (HBL) lati inu enterotoxin (NHE) [37], fa imuṣiṣẹ ti igbona NLRP3.Awọn ijinlẹ ọlọjẹ ti fihan pe awọn ọlọjẹ ọlọjẹ bii SARS-COV-2 apoowe (E) amuaradagba [38] ati ọlọjẹ Zika NS5 protein [39] jẹ awọn PAMP pataki ti a mọ nipasẹ olugba NLRP3.Ninu awọn ẹkọ parasite, ọpọlọpọ awọn parasites ni a ti royin lati ni nkan ṣe pẹlu imuṣiṣẹ inflammasome ogun, gẹgẹbi Toxoplasma gondii, Trichomonas vaginalis [40], Trypanosoma cruzi [41], ati Leishmania [42].Awọn ọlọjẹ granulu ipon GRA35, GRA42, ati GRA43, ti o ni nkan ṣe pẹlu virulence ti Toxoplasma gondii, ni a nilo fun ifilọlẹ pyroptosis ni Lewis rat macrophages [43].Ni afikun, diẹ ninu awọn ẹkọ Leishmania ti dojukọ awọn ohun elo kọọkan ti o ni ipa ninu inflammasome NLRP3, gẹgẹbi parasite membrane lipophosphoglycan [44] tabi zinc metalloprotease [45].Lara annexin-bi alpha-giardin idile ti awọn Jiini, alpha-1 giardin ti han lati jẹ oludije ajesara ti o pọju ti n pese aabo lodi si G. duodenalis ninu awoṣe asin [18].Ninu iwadi wa, a yan G. duodenalis virulence factor alpha-2 ati alpha-7,3 giardines, eyi ti o jẹ alailẹgbẹ si giardia ṣugbọn o kere si iroyin.Awọn jiini ibi-afẹde meji wọnyi ni a ti kọlu sinu pcDNA3.1 (+) eto ikosile eukaryotic fekito fun itupalẹ imuṣiṣẹ igbona.
Ninu awoṣe asin wa, awọn ajẹkù caspase ti o ya ṣiṣẹ bi awọn ami isamisi iredodo.Lori ifarakanra, NLRP3 ṣe ajọṣepọ pẹlu ASC, awọn igbanisiṣẹ igbasilẹ, o si ṣe agbekalẹ awọn caspases ti nṣiṣe lọwọ ti o pin pro-IL-1β ati pro-IL-18 sinu IL-1β ati IL-18 ti o dagba, lẹsẹsẹ -18.Awọn caspases iredodo (caspases-1, -4, -5 ati -11) jẹ idile ti o tọju ti awọn ọlọjẹ cysteine ​​ti o ṣe pataki fun aabo ti inu ati pe o ni ipa ninu iredodo ati eto iku sẹẹli [46].Caspase-1 ti mu ṣiṣẹ nipasẹ awọn inflammasomes canonical [47], lakoko ti awọn caspases-4, -5, ati -11 ti wa ni pipin lakoko dida awọn inflammasomes atypical [48].Ninu iwadi yii, a lo awọn macrophages peritoneal mouse bi awoṣe ati ṣewadii p20 caspase-1 cleaved caspase-1 bi ami ami ti ogun NLRP3 imuṣiṣẹ igbona ni awọn ẹkọ ti G. duodenalis ikolu.Awọn abajade fihan pe ọpọlọpọ awọn alpha-giardins ni o ni iduro fun imuṣiṣẹ deede ti iredodo, eyiti o ni ibamu pẹlu iṣawari ti awọn ohun elo ọlọjẹ pataki ti o ni ipa ninu awọn kokoro arun ati awọn ọlọjẹ.Sibẹsibẹ, iwadi wa nikan ni iboju alakoko ati pe awọn ohun elo miiran wa ti o le mu awọn inflammasomes ti kii-kilasika ṣiṣẹ, gẹgẹbi iwadi wa tẹlẹ ti ri mejeeji ti kilasika ati awọn inflammasomes ti kii ṣe kilasika ni G. duodenalis ikolu [13].Lati pinnu siwaju boya p20 caspase-1 ti ipilẹṣẹ ni o ni nkan ṣe pẹlu inflammasome NLRP3, a yipada alpha-2 ati alpha-7.3 giardins sinu awọn macrophages peritoneal mouse lati pinnu awọn ipele ikosile amuaradagba moleku bọtini ati awọn ipele oligomerization ASC, ti o jẹrisi pe mejeeji α-giardins mu ṣiṣẹ. igbona NLRP3.Awọn abajade wa ni iyatọ diẹ si awọn ti Manko-Prykhoda et al., Ti o royin pe ifarabalẹ ti awọn sẹẹli Caco-2 pẹlu G. muris tabi E. coli EPEC awọn igara nikan le mu ki iṣan fluorescence ti NLRP3, ASC, ati caspase-1 pọ si, botilẹjẹpe kii ṣe pataki, lakoko ti idiyele ti G. muris ati E. coli ṣe pọ si awọn ipele ti awọn ọlọjẹ mẹta [49].Iyatọ yii le jẹ nitori awọn iyatọ ninu yiyan awọn eya Giardia, awọn ila sẹẹli, ati awọn sẹẹli akọkọ.A tun ṣe ni awọn ayẹwo vivo nipa lilo MCC950 ni 5-ọsẹ-atijọ obinrin WT C57BL/6 eku, eyi ti o jẹ diẹ ni ifaragba si G. duodenalis.MCC950 jẹ agbara ati yiyan moleku kekere NLRP3 inhibitor ti o ṣe idiwọ imuṣiṣẹ NLRP3 canonical ati ti kii-canonical ni awọn ifọkansi nanomolar.MCC950 ṣe idiwọ imuṣiṣẹ NLRP3 ṣugbọn ko ni ipa lori imuṣiṣẹ ti AIM2, NLRC4, ati awọn ipa ọna iredodo NLRP1 tabi awọn ipa ọna ifihan TLR [27].MCC950 ṣe idilọwọ iṣẹ NLRP3 ṣugbọn ko ṣe idiwọ ifilọlẹ NLRP3, K+ efflux, influx Ca2+, tabi ibaraenisepo laarin NLRP3 ati ASC;dipo, o ṣe idiwọ imuṣiṣẹ inflammasome NLRP3 nipasẹ didi ASC oligomerization [27].Nitorina, a lo MCC950 ninu iwadi in vivo lati pinnu ipa ti NLRP3 inflammasome lẹhin abẹrẹ giardine.Caspase-1 p10 ti a mu ṣiṣẹ npa awọn cytokines pro-inflammatory pro-IL-1β ati pro-IL-18 sinu IL-1β ogbo ati IL-18 [50].Ninu iwadi yii, awọn ipele IL-1β omi ara ni awọn eku ti a ṣe itọju giardine pẹlu tabi laisi MCC950 ni a lo gẹgẹbi itọkasi boya NLRP3 inflammasome ti mu ṣiṣẹ.Gẹgẹbi a ti ṣe yẹ, itọju MCC950 dinku pataki awọn ipele IL-1β omi ara.Awọn data wọnyi ṣe afihan kedere pe G. duodenalis giardin alfa-2 ati giardin alfa-7.3 ni anfani lati mu NLRP3 mouse inflammasome ṣiṣẹ.
Awọn data pataki ti a kojọpọ ni ọdun mẹwa sẹhin ti ṣe afihan pe IL-17A jẹ olutọsọna tituntosi ti ajesara lodi si G. muris, ti o nfa ifihan IL-17RA, ṣiṣe awọn peptides antimicrobial, ati ṣiṣe ilana imuṣiṣẹ imudara [51].Sibẹsibẹ, ikolu Giardia maa nwaye nigbagbogbo ni awọn ọdọ, ati pe o ti royin pe ikolu Giardia ni awọn eku ọdọ ko mu idahun IL-17A ṣiṣẹ lati ṣe ipa aabo rẹ [52], ti o mu ki awọn oluwadi wa fun Giardia immunomodulatory miiran.awọn ọna ti ikolu helminth.Awọn onkọwe ti iwadi kan laipe kan royin pe G. muris le mu NLRP3 inflammasome ṣiṣẹ nipasẹ E. coli EPEC, eyiti o ṣe iṣeduro iṣelọpọ ti awọn peptides antimicrobial ati dinku agbara asomọ rẹ ati nọmba awọn trophozoites ti o wa ninu iṣan inu, nitorina dinku idibajẹ ti oluṣafihan. awọn arun ti o ṣẹlẹ nipasẹ bacilli [49].Inflammasome NLRP3 ni ipa ninu idagbasoke awọn aarun pupọ.Awọn ẹkọ-ẹkọ ti fihan pe Pseudomonas aeruginosa ṣe okunfa autophagy ni awọn macrophages lati yago fun iku sẹẹli, ati pe ilana yii da lori imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome [53].Fun N. caninum, ifaseyin eya atẹgun-agbedemeji imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome ṣe idinwo ẹda rẹ ni agbalejo, ti o jẹ ki o jẹ ibi-afẹde iwosan ti o pọju [9].Paracoccidioides brasiliensis ni a ti rii lati fa imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome ninu awọn sẹẹli dendritic ti ọra inu egungun eku, ti o yorisi itusilẹ ti cytokine iredodo IL-1β, eyiti o ṣe ipa pataki ninu aabo ogun [10].Orisirisi awọn eya Leishmania, pẹlu L. amazonensis, L. major, L. braziliensis, ati L. infantum chagasi, mu NLRP3 ṣiṣẹ ati caspase ti o gbẹkẹle ASC-1 ni awọn macrophages, bakanna bi ikolu Leishmania.Atunse parasite jẹ imudara ni aipe eku ninu jiini NLRP3/ASC/caspase-1 [11].Zamboni et al.A ti royin ikolu Leishmania lati fa imuṣiṣẹ ti inflammasome NLRP3 ni awọn macrophages, eyiti o ṣe idiwọn ẹda parasite intracellular.Nitorinaa, Leishmania le ṣe idiwọ imuṣiṣẹ NLRP3 bi ilana yago fun.Ninu awọn ẹkọ vivo, inflammasome NLRP3 ṣe alabapin si imukuro Leishmania, ṣugbọn ko kan awọn tissu [54].Lọna miiran, ninu awọn ẹkọ helminthiasis, imuṣiṣẹ ti NLRP3 inflammasome ti tẹ aabo aabo ogun lọwọ lodi si helminthiasis ikun-inu [12].Shigella jẹ ọkan ninu awọn kokoro arun akọkọ ti o nfa igbuuru ni agbaye.Awọn kokoro arun wọnyi le fa iṣelọpọ IL-1β nipasẹ P2X7 ti o ni agbedemeji K + efflux olugba, awọn eeya atẹgun ti n ṣiṣẹ, lysosomal acidification, ati ibajẹ mitochondrial.NLRP3 inflammasome ni odi ṣe ilana phagocytosis ati iṣẹ-ṣiṣe bactericidal ti macrophages lodi si Shigella [55].Awọn ijinlẹ Plasmodium ti fihan pe AIM2, NLRP3 tabi awọn eku aipe caspase-1 ti o ni Plasmodium ṣe agbejade awọn ipele giga ti iru 1 interferon ati pe o lera pupọ si ikolu Plasmodium [56].Sibẹsibẹ, ipa ti alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine ni jijẹ imuṣiṣẹ pathogenic ti NLRP3 igbona ninu awọn eku ko ṣe akiyesi.
Ninu iwadi yii, idinamọ ti NLRP3 inflammasome nipasẹ MCC950 dinku BW ati ki o pọ si awọn nọmba ti trophozoites ni ifun lavage ito ninu eku, Abajade ni diẹ àìdá pathological ayipada ninu duodenal tissues.Alpha-2 giardine ati alpha-7.3 giardine mu Asin ogun NLRP3 inflammasome ṣiṣẹ, mu iwuwo ara asin pọ si, dinku nọmba awọn trophozoites ninu ito lavage ifun, ati dinku awọn egbo duodenal pathological.Awọn abajade wọnyi daba pe G. duodenalis le mu NLRP3 ogun inflammasome ṣiṣẹ nipasẹ alpha-2 giardine ati alpha-7,3 giardine, idinku awọn pathogenicity ti G. duodenalis ninu awọn eku.
Ni apapọ, awọn abajade wa ṣe afihan pe alpha-2 ati alpha-7.3 giardines nfa imuṣiṣẹ ti NLRP3 ogun inflammasome ati dinku aiṣan ti G. duodenalis ninu awọn eku.Nitorinaa, awọn ohun elo wọnyi jẹ awọn ibi-afẹde ileri fun idena ti giardiasis.
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
Liang AKS, Liang AAM, Huang AHC, Sergi KM, Kam JKM.Giardiasis: Akopọ.Laipẹ o ṣafihan pe Pat Inflamm jẹ aleji si awọn oogun.Ọdun 2019;13:134–43.
Escobedo AA, Tsimerman S. Giardiasis: atunyẹwo ti oogun oogun.Iwé Ero ti a elegbogi.Ọdun 2007;8: 1885–902.
Tian Huafeng, Chen Bin, Wen Jianfeng.Giardiasis, resistance oogun ati wiwa awọn ibi-afẹde tuntun.Ṣe akoran awọn ibi-afẹde oogun Disord.Ọdun 2010;10:295–302.
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, bbl NLRP3 inflammasome ati awọn arun aiṣan.Oxide Med Cell Longev.2020;2020:4063562.
Chen GY, Núñez G. Ipa ti inflammasome ni iredodo ifun ati akàn.Gastroenterology.Ọdun 2011;141:1986–99.
Pellegrini C, Antonioli L, Lopez-Castejon G, Blandizzi C, Fornai M. Canonical ati atypical NLRP3 inflammasome muu ṣiṣẹ ni ikorita ti ifarada ajẹsara ati igbona ikun.ṣaaju-ajẹsara.Ọdun 2017;8:36.
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, ati al.ROS-mediated NLRP3 inflammasome activation ti wa ni idahun si N. caninum ikolu.parasite fekito.Ọdun 2020;13:449.